|
Полимеразная цепная реакция,
известная более как "ПЦР" не сходит с заголовков статей научных журналов с тех
пор, как была открыта Кэри Б. Мюллисом в 1983 году, за что он и был удостоен
Нобелевской премии. Часто её описывают как метод, с помощью которого ученые
могут находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл."Иглой"
является крошечный фрагмент генетического материала, а ПЦР не только точно
обнаруживает этот фрагмент, но и затем, используя естественное свойство ДНК-
репликацию (размножение), делает его копии.
В течение нескольких часов с
помощью ПЦР из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 100 млрд.
идентичных молекул.Таким образом, можно изучить генетический материал,
присутствующий в крошечных количествах. Принцип этой реакции достаточно прост и
теоретически для её исполнения нужны лишь пробирка на www.corway.ru, несколько реагентов и
источник тепла. Препарат ДНК, который необходимо копировать, может быть чистым,
а может представлять собой очень сложную смесь биологических веществ. В качестве
источника ДНК подходит и биоптат ткани пациента, и одиночный человеческий волос,
и капля засохшей крови, обнаруженная на месте преступления, и мозг мумии и даже
тело мамонта, пролежавшего 40 000 лет в вечной мерзлоте.
Анализ генетического материала
особенно актуален для медицинской диагностики и ПЦР открывает для этого новые
перспективы. ПЦР - метод молекулярной диагностики, ставший для ряда заболеваний
"золотым стандартом", проверен временем и тщательно апробирован клинически.
Что же может ПЦР?
Основные медицинские области применения этого метода – диагностика
инфекций и наследственных заболеваний.ПЦР открывает поистине фантастические
возможности анализа генома человека – выявления дефектных генов, определяющих
наследственную предрасположенность к заболеваниям.Вместе с тем, интересно и
обнаружение генов, несущих информацию о полезных признаках.Например, генов
снижающих риск опухолевого перерождения тканей или генов, значительно
уменьшающих вероятность заражение ВИЧ-инфекцией.ПЦР используется также при
генетической идентификации личности, определении степени родства.Только
результат анализа ДНК позволяет окончательно дать заключение о достоверности
отцовства.
Но, пожалуй, самое широкое
распространение метод ПЦР в настоящее время получил как метод диагностики
различных инфекционных заболеваний. ПЦР позволяет выявлять этиологию инфекции
даже если в пробе, взятой на анализ содержится всего несколько молекул ДНК
возбудителя. ПЦР широко используется в для ранней диагностики ВИЧ-инфекции,
вирусных гепатитов, клещевого энцефалита, туберкулеза, заболеваний, передающихся
половым путем и т.д. На сегодняшний день практически нет инфекционного агента,
которого нельзя было бы выявить с помощью ПЦР.
Всем известна длительность
процедуры классических методов бактериологического выделения возбудителя
туберкулеза: иногда подтверждение диагноза может занимать 5 –6 месяцев.Если
использовать метод ПЦР, этот срок можно сократить до нескольких
часов.Высокочувствительный анализ проведенный сразу после укуса клеща позволит
ответить на вопрос произошло ли заражение вирусом клещевого энцефалита или
боррелиозом – методы профилактики и лечения этих клещевых инфекций совершенно
различны. Это лишь самые яркие примеры преимуществ данного анализа.
Важное значение метод имеет для
мониторинга и оценки эффективности терапии, особенно при вирусных
заболеваниях.Определение “вирусной нагрузки”, т.е. количества вирусных частиц в
крови позволяет осуществить индивидуальный подбор дозы противовирусных
препаратов. При помощи ПЦР удается выявить отдельные субтипы и штаммы вирусов и
бактерий, обладающих повышенной устойчивостью к тем или иным лекарственным
препаратам.
Говоря о несомненном
прогрессивном значении метода ПЦР, его неоспоримых преимуществах, вместе с тем,
следует знать и об определенных проблемах его проведения. Чрезвычайная
чувствительность метода требует строго соблюдения специального технологического
режима, тщательного выполнения всех этапов анализа в отдельных изолированных
зонах лаборатории. Недостаточная внимательность к процедурным тонкостям влечет
неизбежную контаминацию проб и появление ложно- положительных результатов.
Широкое использование
недостаточно отработанных тестов при диагностики урогенитальных заболеваний, к
сожалению, часто приводит к неверному результату и необоснованному назначению
дорогостоящей терапии, иногда оставляющей массу побочных эффектов. Таким
образом, недобросовестное проведение анализа ведет к незаслуженной дискредитации
метода.
С другой стороны, метод ПЦР,
как и любой другой тест антигенной диагностики во многом зависит от правильности
забора и транспортировки исследуемого материала. Взятая “не с того места” проба
может вообще не содержать возбудителя. Особенно требовательны к условиям
хранения и транспортировки РНК -содержащие вирусы: вирус ВИЧ, гепатита С,
клещевого энцефалита.Если до проведения анализа пройдет более 6 часов, такие
пробы должны быть обязательно подвергнуты глубокой заморозке.
Для правильной интерпретации
результатов необходимо также знать, что выявление ДНК возбудителя не всегда
говорит о состоянии его жизнеспособности, а также о непосредственной связи
выявленного инфекционного агента с конкретным патологическим процессом.Результат
ПЦР значительно увеличивает свою информативность при комплексном обследовании
пациентов с дополнительным использованием других лабораторных (иммуноферментных,
биохимических и др.) и клинических исследований.
|
