|
Маликова С.А.
Несмотря на то, что обнаружение фосфатазной активности является одним
из давно используемых энзиматических лабораторных тестов, он не теряет своей
значимости и в настоящее время, особенно при заболеваниях гепатобилиарной
системы. Данный тест является постоянно востребованным, так ежегодно в
лаборатории городской клинической больницы № 20 г. Красноярска проводится в
среднем около 4000 исследований в год по определению активности общей щелочной
фосфатазы (ЩФ), что составляет около 12 % общего от количества всех исследований
активности ферментов в сыворотке крови.
Определение активности фермента проводится методом, основанным на гидролизе p
-Npp, по конечной точке.
Использовались наборы :
1. ,,Диахим-ЩФ“ НПФ ,,Абрис +“.(АМП буфер с сульфатом магния).
2. ,,Новофосфал“ ЗАО ,,Вектор-Бест“ (ДЭА буфер с магнием хлористым).
3. Фирмы ,,Vital D-s” (с глицериновым буфером).
Внутри лабораторный контроль качества по данному методу осуществлялся с
использованием контрольных материалов фирмы Медлакор: ,,ЖСВ-контроль“, ,,ЖСП-контроль“.
На начальном этапе внедрения методологии контроля качества, определенном в
приказе № 45 МЗ РФ от 07.02. 2000 г статистическая обработка данных показали не
соответствие полученных результатов (CV 20 % , В 20) с рекомендуемыми нормами
(1).
Работа с литературой и анализ практических результатов с целью повысить качество
определения активности фермента, позволили выделить ряд проблем, связанных с
определением активности ЩФ. В результате мы пришли к необходимости обязательного
учета проведении данного теста следующих факторов:
1. Стандартизация биологического материала - определение
активности ЩФ следует проводить только в сыворотке крови. Использование
антикоагулянтов ведет к снижению ферментативной активности. Ингибирующее влияние
антикоагулянтов отражено на диаграмме.
1-активность ЩФ сыворотки.
Активность ЩФ плазмы, полученной с использованием в качестве антикоагулянта:
2-гепарина, 3-оксалата, 4-цитрата, 5-ЭДТА.
Наибольший ингибирующий эффект наблюдается при использовании ЭДТА (связан с
образованием комплексов ЭДТА с ионами Mg**)(2). Наиболее приемлемым
антикоагулянтом для определения активности ЩФ в плазме является гепарин.
2. Стандартизация сроков хранения. По данному вопросу в
литературных источниках существуют разные мнения. Если нет возможности провести
анализ в день получения сыворотки или необходимо повторное исследование пробы на
следующий день, мы придерживаемся следующих условий: сыворотку лучше хранить при
комнатной температуре в пластиковой пробирке с пробкой. При замораживании
активность может снижаться, а при хранении в холодильнике – повышаться до 10 %
(3).
3. Особенности приготовления рабочего раствора для ферментативной
реакции, используя реагенты различных фирм.
Наборы фирмы ,,Vital D-s”: буфер и p-Npp полностью готовы к проведению
анализа; не требуют дополнительного растворения и разведения дистиллированной
водой, возможно приготовления любого минимального количества рабочего реактива.
Показатели контрольной сыворотки с использованием рабочего реактива ,,Vital D-s”
стабильны в течении всего срока годности.
Для приготовления рабочего реактива по наборам ,,Новофосфал-ЩФ“ необходимо
использовать дист. воду, свободную от карбонатов. И хотя рабочий раствор годен
по методике в течение недели, лучше его готовить в количестве необходимом для
работы на 1-2 дня.
4. Необходимость постановки контроля для каждой пробы особенно для
сывороток с высоким содержанием билирубина, иначе результаты будут ложно
завышены.
|
Билирубинммоль\л
|
|
|
|
|
|
|
© 2004 — 2019 medgate.ru, написать письмо
Пути повышения качества определения общей щелочной фосфатазы / Лабораторная диагностика / Медицинские статьи
|
|
|
|
